Иммуноферментный анализ (ифа) на коронавирус

Что значит ИФА-анализ и как он проводится

Суть этого исследования – обнаружение в сыворотке крови и измерение концентрации антител (иммуноглобулинов, Ig). Эти соединения выделяются организмом в ответ на попадание антигенов – чужеродных белков, принадлежащих возбудителям инфекции.

При проведении анализа методом ИФА в сыворотку крови добавляют реактивы, содержащие «меченые» антигены. Эти компоненты «ищут» антитела–иммуноглобулины, выработанные организмом в ответ на имеющуюся инфекцию, и соединяются с ними. Такая реакция называется антиген-антитело.

То есть это исследование ищет не самих возбудителей, а вещества, образовавшиеся из-за их вторжения. Поскольку белки антигенов, входящие в состав реактивов, метят определённым образом, их соединения с иммуноглобулинами можно обнаружить лабораторным путем. При выявлении в образце сыворотки крови комплексов антиген-антитело ИФА-анализ считается положительным.

Лабораторные исследования

Применяемые реактивы «настроены» на конкретных возбудителей. Это дает возможность устранить ложноположительные тесты, указывающие на несуществующее заражение.

Исследования дают возможность выявить примерный период заражения, а также определить характер и тяжесть болезни. С помощью этого метода также определяют содержание каждого из иммуноглобулинов или их общую (суммарную) концентрацию, которая меняется в зависимости от периода и тяжести заболевания.

В разные периоды болезни выделяется несколько видов антител (иммуноглобулинов, Ig):

• IgM – образуются в острую фазу болезни, т.е. примерно через 2 недели после инфицирования. Затем их уровень постепенно падает.
• IgA – появляются в разгар инфекционного процесса. По мере выздоровления их содержание уменьшается. Если уровень IgA в ходе лечения не снижается, велика вероятность, что болезнь перешла в хроническую форму.
• IgG – выявляются на этапе выздоровления. Они могут долго обнаруживаться в организме даже после полного излечения. В некоторых случаях такие иммуноглобулины остаются в организме пожизненно. В такой ситуации ИФА крови показывает не имеющуюся, а когда-то перенесенную инфекцию.

Обнаружение IgM и IgG указывает на обострение хронического инфекционного процесса, поэтому считается неблагоприятным признаком.

Особенности проведения теста и расшифровка

В большинстве случаев для иммуноферментного исследования берется кровь больного. Но при определенных обстоятельствах может осуществляться забор тканей с поверхности стекловидного тела. У беременных женщин ИФА диагностика может проводиться посредством изучения состава околоплодных вод.

Забор крови выполняется с использованием шприца, при этом материал для исследования берут, как правило, из вены, походящей на внутренней стороне локтевого сгиба. Пациент при этом должен находиться в расслабленном состоянии, в положении сидя.

Особенности подготовки

Анализ крови на ИФА требует выполнения определенных подготовительных процедур:

• отказа от завтрака в день теста;
• прекращения приема препаратов, разжижающих кровь, и других фармакологических средств, способных повлиять на результаты (после предварительной консультации у лечащего врача);
• воздержания от курения в день исследования;
• отказа от употребления спиртного за день до забора крови;
• исключения приема наркотических веществ (в том числе, и медпрепаратов, которые их содержат).

Соблюдение таких правил подготовки к иммунохимическому анализу крови исключает возможность искажения данных.

Трактовка данных

Результаты исследования выдаются пациенту на руки, после чего он проходит повторную консультацию у специалиста. Расшифровка данных ИФА может быть положительной или отрицательной. При этом в расчет также принимаются цифры, обозначающие уровень иммуноглобулинов (если таковые были обнаружены).

Если ИФА отрицательный, это может говорить об отсутствии патологических процессов, либо о начальной фазе их развития. Также «минусовый» результат исследования наблюдается при выздоровлении пациента после пройденного курса терапии. Но подобные данные можно получить только по истечении определенного промежутка времени (1 – 2 месяцев).

Если иммуноглобулины IgA и IgM в крови отсутствуют, а анализ ИФ показал положительный результат на IgG, это может свидетельствовать о том, что у пациента сформировался стойкий иммунитет к определенному виду антигенов. Подобное происходит при иммунизации.

При высокой концентрации IgM на фоне отсутствия IgG и IgA речь может идти о воспалительном процессе, протекающем в острой фазе.

Что означает, если ИФА положительный для всех видов иммуноглобулинов? В подобных случаях речь может идти о рецидиве инфекционной патологии. При этом возникновение антител фиксируется только при острой фазе хронической болезни.

При переходе заболевания в фазу затухания показатели IgM будут отрицательными. А вот ИФА на IgG и IgA будет положительным.

Как делают анализ

Основным материалом для иммуноферментного анализа является сыворотка крови. У пациента берут кровь из вены, потом её подвергают центрифугированию, чтобы избавиться от лишних кровяных телец. Вместо венозной крови можно использовать околоплодные воды, мазки со слизистых оболочек и спинномозговую жидкость.

Особенности подготовки

Для того чтобы сохранить точность результата, анализ сдаётся натощак, а за две недели до его выполнения отменяют приём противовирусных и противомикробных препаратов. Такие меры принимаются, чтобы исключить влияние внешних факторов на результаты исследования.

Порядок взятия пробы

Условия получения биологического материала крайне важны для точности будущего результата. Довольно многое зависит от техники забора крови и стерильности инструментов. Как правило, взятие кровяной сыворотки осуществляют так, чтобы проникновение иглы в окружающие вену ткани произошло в один прокол. Кровь должна стекать по стенке пробирки равномерно, чтобы входящие в её состав эритроциты не разрушились в процессе анализа.

Когда проводят исследование крови, и когда будет результат

Для того чтобы иммуноферментный анализ дал точный ответ, исследование проводят натощак утром. Временной промежуток, в который можно получить результат, составляет от одного до трёх дней. Срок получения заключения может быть сокращён до нескольких часов при участии врача, который сможет сразу же расшифровать показатели. Сущность анализа сводится к получению определённых антител или антигенов.

Иммуноферментный анализ проводится по такой схеме. Сначала получают образец биологической жидкости (чаще всего – сыворотка крови). Для исследования используют пластиковые планшеты с лунками, в которые помещены очищенные антигены интересующего возбудителя, если целью анализа является определение антител, или антитела, если оценивают антигены. Полученный у пациента биоматериал вносится в заполненные лунки, затем наблюдают за реакцией. Если в крови обследуемого есть искомые соединения, образуется иммунный комплекс «антиген-антитело», если нет – ничего не произойдёт. Для визуализации химического процесса в лунку вводят красящее вещество, которое реагирует с объединённой молекулой, и это фиксируется путём инструментальной оценки оптической плотности.

Что такое анализ крови, проводимый методом ИФА

Это лабораторное исследование, которое позволяет определять наличие специфических антител (защитных факторов крови белковой природы) к определенным антигенам (болезнетворным агентам). Среди антител первостепенное значение имеют иммуноглобулины, которые могут существовать в виде иммунокомплексов.

Иммуноглобулины вырабатываются вследствие сложных нейрогуморальных  реакций  иммунитета человека, возникающих как ответная реакция на внедрение чужеродных антигенов. На каждый вид болезнетворного агента вырабатываются свои специфические антитела. Действуют они путем «связывания» антигена или патологического микроорганизма, образую комплексное соединение «антиген-антитело» с последующей нейтрализацией, ферментативным лизисом, реакциями фагоцитоза и выводом из организма.

Обратите внимание: именно по наличию определенных комплексов методом ИФА определяется вид возбудителя или имеющегося у больного вредного вещества. Узнать базовые принципы функционирования иммунитет человека вы сможете, посмотрев данный видео обзор:

Узнать базовые принципы функционирования иммунитет человека вы сможете, посмотрев данный видео обзор:

https://youtube.com/watch?v=jXwr0fag4U0

Когда назначается иммуноферментный анализ крови

Существует множество показаний для проведения ИФА диагностики. Наиболее распространенными целями данного обследования являются:

1. Диагностика инфекционных заболеваний (вирусные гепатиты, ВИЧ, ЦМВ, ВЭБ, герпес, ветряная оспа, хеликобактер, заболевания передающиеся половым путем, токсоплазмоз, краснуха, корь и многие другие).
2. Отслеживание эффективности вакцинации (наиболее актуальным является оценка титра антител к столбняку у лиц, получивших травму, с целью решения вопроса о введении профилактической прививки и/или анатоксина).
3. Общая оценка показателей иммунитета, диагностика некоторых аутоиммунных патологий (системной красной волчанки, гломерулонефрита, тиреоидита).
4. Выявление некоторых онкомаркеров (ФНО, РЭА, ПСА).

Также с помощью иммуноферментного анализа определяется концентрация тестостерона, пролактина, прогестерона, ТТГ и других гормонов.

Особенности проведения исследования 

Материалом для исследования чаще всего служит сыворотка крови. Для этого в лаборатории берут венозную кровь. Для получения достоверного результата, забор биоматериала следует проводить утром натощак после 8-10 часового голодания. Это необходимо для того, чтобы кровь не свернулась, а плазма не стала мутной.

В дальнейшем из крови с помощью центрифугирования удаляются форменные элементы, затрудняющие диагностику (эритроциты, тромбоциты, лейкоциты), и проводят непосредственно ИФА анализ. При нем в полученный образец добавляется небольшое количество специфических антигенов. Полученная положительная реакция говорит о присутствии инфекции в организме или наличии иммунитета к ней.

Материалом для исследования также могут служить: ликвор, слезная жидкость отделяемое из глаз, урогенитальные и цервикальные мазки, околоплодные воды.

Срок выполнения анализа в среднем составляет 1-2 суток. При необходимости быстрого получения ответа в случае подозрении на некоторые опасные патологии, ИФА может быть выполнен в течении 2-3 часов.

Интерпретация анализа 

Расшифровкой полученных результатов, когда сдан иммуноферментный анализ крови, должен заниматься лечащий врач, оценивая их в комплексе с клинической картиной болезни и другими методами диагностики (общий и биохимический анализ крови, полимеразная цепная реакция и т. д.)

Результаты могут быть следующими:

• Положительный IgM говорит об остром течении инфекционного заболевания. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии болезни (организм не встречался с возбудителем), так и о хронизации процесса или выздоровлении. Также отрицательный результат может говорить об отсутствии иммунного ответа (у лиц с иммунодефицитными состояниями, после трансплантации органов и костного мозга, принимающих иммуносупрессию, химиотерапевтические препараты).
• Наличие IgA при отсутствии IgM обычно говорит о скрытой, бессимптомной инфекции. Либо о том, что с момента заражения прошло 1-2 суток и специфические антитела класса М не успели выработаться.
• Положительные результаты IgM и IgA одновременно — свидетельствует о разгаре острой фазы заболевания.
• Появление в крови IgG к инфекционному агенту говорит о переходе патологии в хроническую стадию, либо о выздоровлении и выработке естественного (а в случае вакцинации искусственного) иммунитета к патогену.

С целью уточнения диагноза при отрицательном или сомнительном результате первого анализа, при наличии явной клиники инфекционного процесса, повторить исследование рекомендуется спустя 14 суток, т. к. спустя данный промежуток времени в большинстве случаев организм успевает выработать достаточное количество антител.

Реклама партнеров

Виды иммуноглобулинов

Все антитела делятся на несколько видов, исходя из того, на какой из стадий иммунного ответа они образуются.

Первыми в игру вступают иммуноглобулины класса М, которые обозначаются аббревиатурой IgM. Данные соединения вырабатываются на стадии проникновения в организм инфекции. Как правило, максимальные их значения в крови диагностируются в первый-третий дни заболевания.

Как только инфекция распространилась по тканям и органам, иммунная система начинает вырабатывать антитела класса G. Они отвечают за уничтожение антигенов, которые попали в организм, вплоть до полной победы над ними. Данные соединения продолжают находиться в теле человека длительное время, циркулируя по крови и обеспечивая стойкий иммунитет к тому или иному заболеванию. На этом факторе и основывается вакцинация. Вакцинные препараты содержат образцы антигенов – ослабленные и убитые микробы или вирусы, их части, искусственно синтезированные патогенные белки. При выполнении прививки в теле человека вырабатывается большое количество иммуноглобулинов IgG, которые при встрече с реальным возбудителем болезни смогут уничтожить его в короткий срок или существенно снизить нанесённый ним вред.

Иммуноглобулины класса А содержатся в слизистых оболочках и предотвращают дальнейшее проникновение инфекции, а антитела IgE защищают от инфекционных болезней, вызванных паразитами.

Для лабораторных исследований значимыми являются иммуноглобулины классов М, G и А. Оценка их количества позволяет сделать вывод о стадии инфекционного процесса и интенсивности его протекания. Кроме того, эти показатели информативны для подтверждения факта перенесённого заболевания – например, краснухи, ветряной оспы или гепатита А.

Принцип ИФА и сходство с ПЦР

Помимо ИФА, есть много лабораторных исследований, показывающих наличие заболевания. Иммуноферментный анализ стал современной заменой бактериальным посевам, проведение и интерпретация результатов которых занимали 3-5 дней. В течение этого времени врачам приходилось действовать вслепую. ИФА позволило медицине перейти на новый уровень.

Лаборатория делает комплексное исследование крови на всевозможные антигены и антитела, которые предполагает врач, всего за несколько часов. Иммуноферментный анализ крови и расшифровка результатов занимают некоторое время, но не более суток. Для этого в лабораторных условиях воспроизводится реакция «антиген-антитело» с применением имеющихся реактивов. Это позволяет определить, есть ли в исследуемом образце биологического материала соответствующее соединение. ИФА показывает, в какой стадии развития находится инфекционное заболевание, но не может рассказать о возбудителе. Такие данные может дать только полимеразная цепная реакция.

Суть этого метода – в выявлении непосредственного возбудителя. ИФА и ПЦР имеют некоторые сходства, но со стороны профессиональной лабораторной диагностики представляют абсолютно разные методы анализа. Таким образом, ИФА может показывать продукты жизнедеятельности возбудителей, а ПЦР – самого «виновника» болезни. Данная информация может значить только одно – комплексное использование лабораторных методов позволяет быстрее идентифицировать заболевание и начать лечение пациента.

Плюсы и минусы теста

Исследование крови методом ИФА имеет свои сильные и слабые стороны. К плюсам можно отнести:

• относительно невысокую стоимость;
• точность;
• возможность регулярного проведения с целью оценки эффективности проводимого лечения;
• быстроту выполнения;
• использование высокоточных и высокоинформативных технологий для получения достоверных результатов;
• возможность проведения множественных исследований в области одного и того же очага патологического процесса;
• абсолютную безболезненность;
• отсутствие любых рисков для здоровья пациента;
• относительную простоту исследования.

Исследование крови ИФА, благодаря вышеописанным преимуществам, приобрело широкую распространенность, и играет немаловажную роль в диагностике различных заболеваний.

Недостатки

Существенным минусом ИФА крови является вероятность получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов. Но это связано в большинстве случаев не с самим методом исследования, а с человеческим фактором.

Еще один нюанс, способный повлиять на конечные данные, — применяемые в ходе теста медикаментозные препараты. При их неправильном использовании, либо же в случае брака, расшифровка анализов ИФА будет недостоверной. Следовательно, исследование придется проводить повторно.

История создания и развития ИФА

Данный метод исследования крови стал применяться в практической медицине еще в середине прошлого столетия – где-то в 60-х годах. Изначальной его целью были научные исследования в области гистологии, которые ограничивались поиском и изучением клеточной антигенной структуры биологических видов. Анализ крови методом ИФА основан на взаимодействии родственных антигенов (АГ) и специфических антител (АТ), с формированием комплекса «антиген-антитело», определяемого ферментом.

Такой феномен подтолкнул ученых к решению, что способ можно применять для распознавания белковых соединений различных классов, образующихся в сыворотке крови при попадании в организм возбудителя. Из-за своей непосредственной вовлеченности в функционирование иммунной системы эти соединения получили название иммуноглобулины (ИГ, Ig), а открытие стало величайшим прорывом в лабораторной диагностике.

При этом активно использовать этот высокочувствительный метод стали лишь в 80-х годах, и доступен он был только в узкоспециализированных медицинских учреждениях. Самыми первыми получили возможность пользоваться иммуноферментными анализаторами станции и центры переливания крови, венерологические и инфекционные лечебные заведения. Это было связано со стремительным распространением «чумы XX века» – СПИДа, и требовалось срочное принятие диагностических и терапевтических мер.

ИФА-диагностирование на ВИЧ-инфекции

В мире, где заразиться ВИЧ (Вирус иммунодефицита человека) возможно даже при походе к стоматологу, очень остро стоит вопрос о диагностики этого заболевания. Сейчас пройти исследования крови на ВИЧ можно в анонимной лаборатории. Кровь берётся из вены. Целесообразно проводить ИФА-диагностику на ВИЧ после переливания крови, полового акта без презерватива и т.д. Обязательно стоит учитывать инкубационный период заболевания. Он может составлять от 40 до 95 дней.

Если всё-таки определяется ВИЧ, то для постановки окончательного диагноза проводится тщательное лабораторное обследование. Кровь из первого забора подвергается повторной перепроверке на новой тест-системе. Если положительный результат повторяется, кровь у пациента берётся повторно и тестируется. В случае повторного положительного результата кровь тестируют особо чувствительной тест-системой 3 раза подряд. Если результаты теста повторяются, проводят иммуноблотинг, и только после этого даётся окончательный ответ.

ИФА анализ крови

ИФА (иммуноферментный анализ) производится в лабораторных условиях для того, чтобы выявить степень защиты организма, а именно его функций. В ходе такой процедуры специалист может определить свойства и количество клеток, а также наличие антител в организме. Такое тестирование может быть проведено для диагностирования аутоиммунных, гематологических или инфекционных заболеваний.

Чтобы провести такое исследование крови ИФА, должны быть определенные показания для этого. Их обычно выявляет врач, который и проводит лечение.

Кровь может браться на анализ в таких случаях:

1. Для диагностирования инфекций, которые могут передаваться половым путем (сифилис, хламидиоз и прочие).
2. Для диагностирования наличия вирусных инфекций (гепатит, герпес и прочие).
3. Для выявления количества и качества гормонов в теле.
4. Для диагностирования онкологического заболевания.
5. Для определения уровня иммунодефицита.
6. Для диагностирования организма на наличие тех или иных заболеваний при пересадке органов.
7. Для оценки эффективности проводимой терапии.

В основе данного принципа анализа лежит то, что при помощи его можно выявить в организме иммуноглобулины (белковые антитела). Такие тела вырабатываются организмом, а именно иммунной системой, когда в тело попадает инфекция. Такие вещества, которые вырабатывает организм, способны связываться с возбудителями инфекции и нейтрализовать их в процессе этого.

Классификация антител, которые борются с инфекцией в организме

Иммуноглобулины имеют особую характеристику. Это специфичность, чем и отличаются от других антител. Благодаря такой своей способности они могут связываться с другими антигенами, образовывая комплексное антитело. Именно при анализе ИФА и можно выявить такие тела в крови. В настоящее время специалисты различают иммуноглобулины пяти типов.

Обычно же их делят на три класса:

1. А.
2. М.
3. G.

Такие антитела могут накапливаться в организме человека при попадании в него инфекции. При этом появляются они в разное время после инфицирования.

Самые первые, которые появляются в крови после инфицирования, это антитела класса М. Они образуются на пятый день после заражения. Находятся в теле они 20-24 дня, а потом исчезают. Такие антитела могут указывать на то, что инфекция в организме острая или уже перешла в хроническую стадию. Это дает врачу информацию о том, что надо незамедлительно начинать процесс лечения.

Через 20-25 дней после появления заражения появляются тела G. Внутри человека они могут находиться на протяжении двух лет. Если при сдаче тестов два раза подряд будут выявлены эти антитела в крови (между анализами промежуток составляет 2-3 недели), то это говорит врачу, что инфекция в организме протекает повторно. То есть, человек еще раз заразился подобной инфекцией.

Тела класса А можно обнаружить в организме через 2-3 недели после инфицирования или обострения болезни. Тут следует отметить, что только 20% этих тел могут находиться в крови. Все остальные же в это время будут располагаться на слизистых. Полностью исчезают такие антитела через 3-7 недель после того, как они уничтожат тела инфекции. Если их при проведении анализа не будет обнаружено в теле, то это говорит о том, что инфекции нет в организме. Если на протяжении определенного срока в организме еще будут обнаружены данные антитела, то это может сказать о том, что заболевание стало уже хроническое.

Чтобы провести тестирование ИФА, берется кровь у пациента. Есть также возможность проводить данные исследования и при взятии другого материала, например, околоплодных вод или спинномозгового вещества. Кровь обычно берется для тестирования из вены.

Специалисты советуют данные тесты сдавать на голодный желудок. После употребления еды должно пройти 10-12 часов. Также, если клиент употребляет какие-либо лекарственные препараты при сдаче анализа ИФА, то он должен сообщить об этом своему лечащему врачу. Это может повлиять на точность тестирования. На достоверность тестирования влияет спиртное или наркотики. Их не следует употреблять на протяжении 3-5 дней перед сдачей анализов.

После проведения исследования сданного материала врач ставит диагноз. Он может быть положительным (+) или отрицательным (-). Такие оценки ставятся по каждому классу иммуноглобулинов.

Что такое иммуноферментный анализ?

Иммуноферментный анализ крови — это один из способов лабораторной диагностики, который основан исключительно на реакции под названием «антиген-антитело». Здесь стоит уяснить, что антиген — это чужеродное белковое соединение (молекула), попавшее в организм человека с паразитарной, вирусной или другой инфекцией. То есть, попросту вредитель. В свою очередь антитело — это иммунная клетка (иммуноглобулин), встающая на защиту организма человека при обнаружении в нем чужеродных молекул.

Выработку антител провоцируют сами же антигены, проникшие в организм человека. При вступлении в «битву» за здоровье организма антитела как бы помечают собой антигены, что при исследовании крови и видит лаборант. То есть в забранном биоматериале можно отследить не только наличие инфекции, но и ее следы уже после того, как организм полностью выздоровел.

При проведении анализа на ИФА лаборант может видеть такие иммуноглобулины к антигенам:

• Иммуноглобулины М (в результатах значатся как IgM). Свидетельствуют о том, что инфекционный процесс в организме только набирает свою силу. То есть инфицирование произошло совсем недавно;
• Иммуноглобулины G (значатся как IgG). Способствуют уничтожению антигенов через несколько дней после внедрения инфекции в организм человека. Иммуноглобулины G могут находиться в организме пациента достаточно долго, формируя иммунитет к определенному вирусу;
• Иммуноглобулины Е (значатся как IgЕ). Свидетельствуют о паразитарных инфекциях в организме. Он же говорит и об атопических реакциях при аллергии. При этом стоит знать, что проведение анализа ИФА дает результат с точностью 90% на паразитарные инфекции;
• Иммуноглобулины А (значатся как IgА). Максимально выступают на защиту слизистых оболочек пациента.

Таким образом, назначая иммуноферментный анализ крови пациенту, лечащий врач может отследить давность инфекции, степень ее прогрессирования или выявить наличие иммунитета к той или иной инфекции.

Процесс ИФА диагностики выглядит таким образом:

• Забранная венозная кровь приводится в лаборатории в состояние сыворотки крови;
• Затем лаборант использует специальный лоток с ячейками, в каждой из которых уже имеются все необходимые антигены. Достаточно просто капнуть в каждую ячейку сыворотку крови и отследить реакцию иммуноглобулинов (антител) на антигены. О наличии «нужной» реакции свидетельствует изменение цвета исследуемого материала. В дальнейшем лаборант изучает оптическую плотность исследуемой среды.

В целом иммуноферментный анализ на паразитов помогает выявить такие паразитарные патологии:

• Аскаридоз и энтеробиоз (аскариды и острицы);
• Трихинеллез;
• Описторхоз в острой и хронической формах;
• Лямблиоз;
• Амебиоз;
• Токсоплазмоз;
• Лейшманиоз в любой форме.

Подготовка к исследованию

Необходимо правильно подготовиться, чтобы получить достоверные результаты после первого тестирования. Что для этого требуется:

• за сутки отказаться кофе, алкогольных напитков, жирных блюд, продуктов, насыщенных солью и пряностями;
• избегать в течение дня открытых солнечных лучей;
• при возможности не принимать препараты с противомикробным, противовирусным или антибактериальным действием;
• отказаться от чрезмерной двигательной активности, тяжелых физических нагрузок в течение суток перед тестированием.

Для ИФА сдают кровь преимущественно из локтевой вены в утреннее время. Если обследуемый человек не должен по медицинским показаниям пропускать очередной прием пищи, то тестирование выполняется спустя 3-5 часов. Сотрудники лабораторий рекомендуют не курить за час до сдачи крови, согласовать медикаментозную терапию хронических заболеваний с лечащим врачом.

Забор крови проводится лаборантом или врачом, который прибыл на дом пациента для обследования или выполнения платного тестирования. Он просит человека согнуть руку в локте, накладывает жгут. После сжимания и разжимания кулака вена заполняется кровью. Врач обрабатывает место прокола антисептическим раствором, чтобы исключить инфицирование тканей в местах введения иглы. При заборе биоматериала используется стерильный шприц.

Важно: Для тестирования на коронавирус методом ИФА требуется 10-20 мл крови из локтевой вены.

Самый волнительный из иммуноферментных анализов – ИФА на ВИЧ

Анализ на ВИЧ, пожалуй, больше других интересен широкому кругу населения, ведь пока нельзя с уверенностью утверждать, что исчезли многие социальные проблемы (проституция, наркомания и др.). К сожалению, ВИЧ затрагивает не только эти слои человеческого общества, заразиться можно при различных обстоятельствах, не связанных с половой распущенностью или приемом наркотиков. Но коль возникла необходимость обследования на ВИЧ, то бояться не следует, что все вокруг узнают о посещении такой лаборатории. Сейчас ВИЧ-инфицированные люди защищены законом, а сомневающиеся могут обратиться в анонимные кабинеты, где можно решить проблему, не боясь огласки и осуждения.

ИФА на ВИЧ имеет смысл проводить после полового контакта, переливания крови, других медицинских манипуляций, предполагающих заражение, и по окончании инкубационного периода («серонегативное окно»), но следует учитывать, что этот промежуток времени не является постоянным. Он может закончиться через 14-30 дней, а может продолжаться до полугода, поэтому средним значением принято считать интервал от 45 до 90 дней. На ВИЧ кровь сдают так же, как и на другие инфекции – из вены на голодный желудок. Результаты будут готовы в зависимости от накопления материала в лаборатории и ее загруженности (от 2 до 10 дней), хотя чаще всего лаборатории обеспечивают получение ответа в тот же день или на следующий.

Что можно ожидать от результатов на ВИЧ?

ИФА на ВИЧ-инфекцию определяет антитела к двум разновидностям вируса: ВИЧ-1 (более распространенный в России и других странах Европы и Азии) и ВИЧ-2 (встречающийся чаще на территории Западной Африки).

Задачей ИФА ВИЧ является поиск АТ класса G, которые выявляются на всех тест-системах, но в более позднем периоде, и АТ классов А и М, выявляемых на рекомбинантных тест-наборах нового поколения, позволяющих найти антитела на самых ранних стадиях (инкубационный период – «серонегативное окно»). От ИФА можно ожидать следующие варианты ответов:

1. Первичный положительный результат: кровь подлежит перепроверке на тест-системе такого же типа, но по возможности другой серии и другим человеком (лаборантом);
2. Повторный (+) предполагает новый забор крови у пациента с исследованием ее подобно первичному анализу;
3. Очередной положительный результат подлежит референтному анализу, при котором используются высокоспецифичные тест-наборы (2-3 шт.);
4. Положительный результат в обеих (или в трех) системах направляется на иммуноблотинг (тот же ИФА, но выполненный в индивидуальном порядке на тест наборах особо высокой специфичности).

Заключение о ВИЧ инфицировании выносится только на основании иммуноблотинга. Проводится беседа с инфицированным в условиях полной конфиденциальности. Разглашение медицинской тайны в России, как, впрочем, и в других странах, подлежит уголовному наказанию.

Как делают анализ

После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены.

Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так:

• Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag).
• Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab).
• Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе.

В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора.

Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА.

При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей.

Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном.

При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию.

Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете.

Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами.

Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате.